逆转录病毒（RV）构建与包装

定义

逆转录病毒是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒RNA为模板合成cDNA,再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。

逆转录病毒载体优点：

1、转染范围广，可以感染各种细胞类型，如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等；

2、转入的外源基因可完全整合；

3、对细胞感染率高，达到100 %；

4、 感染细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源基因。

逆转录病毒载体的缺点:

1、只能整合至分裂期细胞；

2、可插入外源基因片断小（<10kb），难以满足较大基因的插入；

3、病毒滴度是限制临床应用的主要方面；

4、有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能，随机整合可能产生不良作用。

逆转录病毒包装程序

1、将基因克隆到表达载体上，

2、转染逆转录病毒包装细胞系，培养后收集上清制备病毒粗提液，

3、病毒纯化、浓缩（根据客户需要），

4、测定病毒滴度

客户提供

1、含有目标基因的质粒（提供测序图谱）或所要表达的目的基因的名称、序列；

2、所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化

3、若需要检测外源基因的表达，如需要请提供相应的抗体

服务承诺

提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的病毒储存液，重组后的逆转录表达载体质粒