MTT或CCK8药物体外细胞毒性检测

原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒 (Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

MTT主要有两个用途：

1、药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；

2、细胞增殖及细胞活性测定。

一般实验方法

贴壁细胞：

1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度1000-10000 孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。

2、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般5-7个梯度，每孔100ul，设3-5个复孔。建议设5个，否则难以反映真实情况。

3、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4、每孔加入20ul MTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5、终止培养，小心吸去孔内培养液。

6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。

客户须知

客户需提供：足量样品、样品信息（如细胞类型、分子量、溶解性、稳定性、保存条件等）、相关实验设计内容（如样品作用时间、浓度等）、细胞株等。武汉市内可上门取样，外地需邮寄样本请提前咨询。

终产品

实验结果、IC50值及完整的实验报告。